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| DH5a 勝任細胞 |
產品編號 ： HD-CPC-052TM
產品規格 ： 10x100ul/vial
廠 牌 ： Hyperdimension |
| 詳細資料 |
一、 產品基本資料
產品名稱：DH5a 感受態細胞 (DH5a Competent Cells)
產品類型：大腸桿菌高效克隆與基因選殖菌株
轉化效率：大於 1 x 10^8 cfu/µg (針對 pUC19 質體 DNA)
產品外觀：低溫凍存之不透明冰狀固體
儲存條件：-80°C 恆溫超低溫冷凍保存，嚴禁儲存於 -20°C，且須避免任何溫度波動。
運輸條件：全程使用乾冰運輸。
產品用途：本產品僅限科學研究與實驗室研發使用，不得用於臨床診斷、人體或動物之醫療與食品。
二、 基因型與化學性質
關鍵基因型特徵：recA1, endA1, gyra96, thi-1, hsdR17, supE44, relA1, deoR, Δ(lacZYA-argF)U169, φ80dlacZΔM15
藍白篩選支持：攜帶 φ80dlacZΔM15 基因突變，配合包含 lacZ 突變的選殖載體時，可支持 α-互補作用，使用 X-Gal 與 IPTG 即可進行直觀的藍白篩選。
重組缺陷特性：攜帶 recA1 突變，該基因失活能完全阻斷細菌體內的同源重組反應（Homologous recombination），從而確保嵌入外源 DNA 片段的遺傳穩定性。
核酸酶缺陷特性：攜帶 endA1 突變，使胞內非特異性核酸內切酶 I（Endonuclease I）失活，能大幅提升從小量製備（Mini-prep）中提取出的質體 DNA 的純度與產量。
三、 核心實驗應用情境
常規基因選殖與克隆放大：作為實驗室最普及、最常用的日常克隆與基因選殖大腸桿菌菌株，適用於各種常規重組質體的構建。
大分子量質體轉化：具備優化的細胞壁通透性，特別適用於高難度的大分子量質體（Large plasmids）轉化實驗。
雙雜交系統重組子篩選：在酵母菌雙雜交系統（Two-hybrid system）等多元交互作用研究中，用於捕獲與擴增下游的重組質體文庫。
高純度質體 DNA 提取：由於 endA1 突變阻斷了質體提取過程中的 DNA 降解，純化出的質體可直接用於下游的哺乳動物細胞轉染、測序或限制酶切實驗。
四、 標準操作步驟
步驟一：感受態細胞解凍
自 -80°C 超低溫冰箱中取出 DH5a 感受態細胞，立即置於冰浴中使其緩慢融化。
完全融化後即可進行下一步，全程請溫和操作，嚴禁使用微量震盪器劇烈漩渦混勻。
步驟二：加樣與冰浴
向融化後的感受態細胞中加入適量待轉化的連接產物（1 至 5 µL）或質體 DNA（10 至 50 ng），用手指輕彈管壁混勻。
將管置於冰浴中靜置 25 到 30 分鐘。
步驟三：熱休克與復甦
將管迅速移至 42°C 水浴中進行熱休克（Heat shock），時間必須精準控制在 45 秒，隨後立即移回冰浴中冷卻 2 分鐘。
在無菌條件下向管中加入 500 µL 不含抗生素的 SOC 或 LB 液體培養基，置於 37°C 振盪培養箱中，以 150 到 200 rpm 復甦培養 60 分鐘。
步驟四：塗布培養
取適量復甦後的菌液（或經短暫離心濃縮後的菌體），塗布於含有對應抗生素（如需要藍白篩選，則需預先塗布 X-Gal 與 IPTG）的固體培養基平板上。
將平板倒置放入 37°C 培養箱中，培養 12 到 16 小時直至單菌落形成。
五、 核心操作注意事項
溫度敏感性限制：DH5a 感受態細胞對溫度極度敏感，即使在 -80°C 下短暫取出或遭遇停電升溫，都會使轉化效率呈對數級急速下降。必須即開即用，嚴禁反覆凍融。
熱休克時間精準度：42°C 熱休克的時間是轉化成功的關鍵。少於 45 秒會導致質體未能成功進入細胞，多於 45 秒則會造成細菌大量死亡。
吸取溫和原則：感受態細胞在融化狀態下細胞壁極度脆弱。吸取時請慢吸慢放，使用微量移液管混勻時動作必須極度輕柔，避免剪切力造成細菌破裂。
抗生素加入時機：復甦培養階段（步驟三）切勿加入任何抗生素，否則會直接抑制剛轉化、尚未表達抗性蛋白的轉化子生長。 |
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