|
|
|
|
|
| |
|
|
| BL21(DE3)勝任細胞 |
產品編號 ： HD-BL21TM
產品規格 ： 5x100uL/vial
廠 牌 ： Hyperdimension |
| 詳細資料 |
BL21(DE3) rne 突變表達型感受態細胞 產品技術規格書
一、 產品基本資料
產品名稱：BL21(DE3) rne 突變高穩定表達型感受態細胞 (BL21(DE3) rne Mutant Competent Cells)
產品類型：大腸桿菌高效蛋白質表達菌株
轉化效率：常規熱休克轉化效率較低，推薦使用優化後的 6 分鐘熱休克冷平板流程以獲取最佳轉化效率。
產品外觀：低溫凍存之不透明冰狀固體
儲存條件：-80°C 恆溫超低溫冷凍保存，嚴禁儲存於 -20°C，且須避免任何溫度波動。
運輸條件：全程使用乾冰運輸。
產品用途：本產品僅限科學研究與實驗室研發使用，不得用於臨床診斷、人體或動物之醫療與食品。
二、 基因型與化學性質
關鍵基因型特徵：F-, ompT, hsdS_B(r_B-, m_B-), dcm, gal, (DE3), rne131
強效蛋白質表達系統：細胞攜帶 lambda DE3 溶源性噬菌體基因組，在 lacUV5 啟動子控制下整合了 T7 核糖核酸聚合酶。透過加入 IPTG 即可強烈誘導 T7 核糖核酸聚合酶表達，進而驅動 T7 啟動子下游目標蛋白的高水平表達。
信使核糖核酸（mRNA）高穩定特性：攜帶 rne 基因突變（rne131），該突變編碼一種切短的核糖核酸內切酶 E（RNase E）。此突變酶完全喪失了降解 mRNA 的能力，進而能顯著提高目標 mRNA 在細胞內的穩定性，大幅增加難表達蛋白或不穩定蛋白的產量。
蛋白酶缺陷特性：具備 ompT 與 lon 雙重蛋白酶缺陷，能有效防止目標蛋白在表達與純化過程中被宿主內源性蛋白酶降解。
三、 核心實驗應用情境
高水平重組蛋白質表達：專為基於 T7 啟動子系統（如 pET 系列載體）的重組蛋白高效表達而設計。
不穩定或難表達蛋白合成：針對在常規菌株中易因 mRNA 快速降解而導致表達量低下的毒性蛋白、真核蛋白或複雜結構蛋白，利用其 mRNA 高穩定特性實現產量突破。
高通量蛋白質表達篩選：搭配優化的快速轉化流程，可用於多個重組構建體的快速轉化與表達效能評估。
四、 標準操作步驟（推薦 6 分鐘熱休克冷平板流程）
步驟一：感受態細胞與平板準備
自 -80°C 超低溫冰箱中取出感受態細胞，立即置於冰浴中使其緩慢融化。
同時，將含有對應抗生素的固體培養基平板預先置於 4°C 冷藏庫中進行冷卻（冷平板準備）。
步驟二：加樣與短暫冰浴
向融化後的感受態細胞中加入適量待轉化的重組質體 DNA，用手指輕彈管壁溫和混勻。
將管置於冰浴中靜置 2 至 3 分鐘。
步驟三：快速熱休克
將管迅速移至 42°C 水浴中進行熱休克，時間精準控制在 30 秒，隨後立即移回冰浴中冷卻 1 分鐘。
步驟四：冷平板直接塗布
在無菌條件下，直接吸取上述經冰浴冷卻後的菌液，塗布於預冷至 4°C 的固體培養基平板上（此快速流程省略了液體培養基復甦步驟，全過程約 6 分鐘）。
將平板倒置放入 37°C 培養箱中，培養 12 到 16 小時直至單菌落形成。
五、 核心操作注意事項
轉化流程選擇限制：本菌株的常規轉化效率通常較低。若您使用的是高難度的連接產物而非純質體，強烈建議嚴格執行上述 6 分鐘熱休克搭配 4°C 冷平板直接塗布的優化流程，以確保獲得足夠的轉化子。
嚴禁劇烈震盪：感受態細胞在融化狀態下細胞壁極度脆弱。吸取時請慢吸慢放，輕彈管壁混勻，嚴禁使用微量震盪器劇烈漩渦混勻，以免剪切力造成細菌破裂。
低溫冷凍嚴格保護：本產品對溫度波動極度敏感，必須即開即用，嚴禁反覆凍融。
誘導表達背景控制：由於 T7 表達系統極為強效，部分目標蛋白可能對宿主菌具備細胞毒性。在誘導前，應確保菌體處於對數生長期（OD600 約 0.6），再加入適當濃度的 IPTG 開啟轉錄。
|
|
來電洽詢
 相關產品列表 |
 購物說明： |
|
|
|
|
|
|
