488標記鬼筆環肽 (488 Rhalloidin) 產品編號 ： Phall-488 產品規格 ： 50T 廠       牌 ： biokit 詳細資料 488標記鬼筆環肽 產品簡介   鬼筆環肽 （Phalloidin）是一種來源於毒蕈類鬼筆鵝膏（Amanita phalloides）的環狀七肽毒素，以高親和力（Kd=20nM）選擇性結合於絲狀肌動蛋白 F-actin，而不會與單體肌動蛋白 G-actin 結合，通常用來標記組織切片，細胞培養物或無細胞體系中的F-actin，從而對F-actin 進行定性和定量分析。另外，鬼筆環肽衍生物也以相近的親和力結合於大小纖維，無論是動植物來源的肌肉細胞或非肌肉細胞，按照每一個肌動蛋白亞基約與一個鬼筆環肽分子的計量比結合。且非特異性結合幾乎可忽略，染色區域和非染色區域辨識度非常明顯。因此，鬼筆環肽衍生物特別適合替代肌動蛋白（Actin）抗體進行相關研究。另外鬼筆環肽衍生物很小，直徑約12-15A，分子量＜2000 Daltons，未標記肌動蛋白（Actin）的許多生理特性都得以維持，比如，同肌動蛋白結合蛋白如肌球蛋白，原肌球蛋白，DNase I 等仍能發生反應：鬼筆環肽標記的纖維絲仍可穿透固相肌球蛋白基質；以及甘油抽提的肌纖維標記後仍可收縮等。 本品為 Phall-488 標記的鬼筆環肽，可發出高亮度、穩定瑩光，染色反應特異性強，對比性高，適合用作 F-actin的定性和定量檢測。與Actin抗體比較，Phall-488鬼筆環肽具有如下優點：1）與 actin 亞單位一比一結合，並且不與 G-actin 結合，具有比 Actin抗體更好的染色效果；2）且本品的結合沒有物種差異性，適用性廣泛；3）鬼筆環肽標記的非特異性信號可忽略，因而圖像的反差較好；4）染色與用於細胞分析的其他瑩光染色完全兼容，包括瑩光蛋白、Qdot納米晶體和其他 iFluor 偶聯物（包含 iFluor 偶聯二抗）；5）經本品結合後的F-actin 仍能維持actin 自身具有的許多生物學特性。 產品組成 名稱/編號 Phall-488 Phall-488 Storage 488標記鬼筆環肽 50T 300T -20°C避光 使用說明書   1份 運輸與保存方法：冰袋運輸。-20°C避光乾燥保存，1年有效。   產品性質 最大激發/發射波長（Ex/Em） Ex/Em=494/512 nm   溶解性 溶於 DMSO、DMF、甲醇或者乙腈水溶液（20%）       需要自備材料 1）1XPBS緩衝液，pH7.4，細胞培養級 2）固定液（4%多聚甲醛溶於PBS緩衝液，pH7.0） 3）破膜液（Triton X-100溶於PBS緩衝液0.5%） 4）BSA，標準級別 5）DAPI染液（即用型） 6）黑框/透明底的96孔細胞培養板   操作步驟 1. 母液及工作液配制 母液準備：對於 488標記鬼筆環肽 (488 Rhalloidin)。本品以5Oul/300u1 存儲母液形式提供，建議根據單次使用量，對母液進行小量分裝，-20°C避光凍存，一年穩定。4°C避光保存，3個月穩定。 工作液準備：開始實驗前，使用1×PBS 緩衝液稀釋儲存液到需要的工作濃度。推薦工作濃度為：1:40~1:200。 工作液現配現用。按照1:200比例來計算，即1ul 體積的 488標記鬼筆環肽 (488 Rhalloidin)溶液中加入200ul的1xPBS緩衝液濃度，300T可進行300次細胞染色。【註】：稀釋比可根據實際實驗效果適當調整。   2. 染色步驟 1：細胞爬片生長 24h，使其密度達到50%匯合度。 2：吸掉培養液，37°C預熱的1XPBS（pH7.4）清洗細胞2次。 3：使用溶於PBS的4%甲醛溶液進行細胞固定，室溫固定10min。 【註】：避免固定劑中含有甲醇成分，因為甲醇在固定過程中可能破壞肌動蛋白。 4：室溫條件下，用PBS清洗細胞2~3次，每次10min。 5：室溫條件下，用丙酮（≤-20°C）脫水或者用0.5% Triton X-100 溶液透化處理5min。 6：室溫條件下，用PBS 清洗細胞2~3次，每次10min。 7：取200ul 配制好的 488標記鬼筆環肽 (488 Rhalloidin)工作液，覆蓋住蓋玻片上的細胞，室溫避光孵育30min（通常情況下，4°C ~37°C孵育皆可）。注意：為了降低背景，可於 488標記鬼筆環肽 (488 Rhalloidin)工作液內加入1%BSA：另外，孵育過程中為了避免溶液揮發，可將蓋玻片轉移到一個密封的容器內。 8：用PBS 清洗蓋玻片3次，每次5min。 9：使用200ul DAPI 溶液（濃度：100nM）對細胞核進行複染，約30s。 10：用PBS清洗蓋玻片，然後倒置在已經滴有一滴Fluoromount-GTM 水溶性封片劑的載玻片上。使用紙巾輕輕擦掉多餘封片劑，然後用指甲油永久封片。此法製備的標本玻片可置於4°C避光保存，通常6個月內可繼續做 F-actin 染色分析。 11：瑩光顯微鏡或者共聚焦顯微鏡下進行瑩光觀察，選擇 488 Rhalloidin 激發/發射濾片（Ex/Em=494/512nm）和DAPI 激發/發射濾片（Ex/Em=364/454nm）。   注意事項 1）鬼筆環肽具有毒性，需小心操作（對人的半數致死劑量LD50約2mg/kg）。 2）為了您的安全和健康，請穿實驗服並戴一次性手套操作。 相關產品 產品貨號 產品名稱 規格 最大激發/發射波長 (Ex/Em) Phall-TRITC 羅丹明標記鬼筆環肽 (TRITC Rhalloidin) 50T 545/570nm Phall-FITC FITC標記鬼筆環肽 (FITC Rhalloidin) 300T 496/516nm Phall-350 350標記鬼筆環肽 (350 Rhalloidin) 50T 347/448 nm Phall-405 405標記鬼筆環肽 (405 Rhalloidin) 50T 404/431 nm Phall-488 488標記鬼筆環肽 (488 Rhalloidin) 50T 494/512 m Phall-555 555標記鬼筆環肽 (555 Rhalloidin) 50T 555/565nm Phall-568 568標記鬼筆環肽 (568 Rhalloidin) 50T 575/598 nm Phall-594 594標記鬼筆環肽 (594 Rhalloidin) 50T 593/614 nm Phall-633 633標記鬼筆環肽 (633 Rhalloidin) 50T 630/650 nm Phall-647 647標記鬼筆環肽 (647 Rhalloidin) 50T 648/664 nm Phall-680 680標記鬼筆環肽 (680 Rhalloidin) 50T 681/698 nm

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